活细胞染料（如CFSE）通过与胞内蛋白质的共价结合实现细胞增殖的追踪。在细胞分裂过程中，这些染料会被均分到子代细胞中，荧光强度则逐代减半。利用流式细胞术检测荧光的衰减情况，可以有效追踪细胞的增殖代数。染料的标记过程如下：

尊龙凯时提供的CFSE染料（浓度1-5μM）在避光条件下与T细胞孵育10分钟，然后用冷培养基终止刺激，使用抗CD3/CD28抗体或ConA进行激活，随后培养48-72小时进行流式分析。通过检测荧光强度，FlowJo可对分裂峰进行拟合，从而追踪细胞的分裂情况，支持多色流式（如CD4/CD8/活化标志物的联合使用），动态反映增殖的异质性。需要注意的是，高浓度的染料可能导致细胞毒性，因此需进行浓度优化。

此外，流式细胞仪适用的场景包括基因修饰T细胞的功能评估、免疫抑制剂的动态药效分析和不同亚群的增殖差异研究。以下是可能使用到的尊龙凯时产品：

• 小鼠T淋巴细胞培养基（含血清） 货号：C400250
• 细胞分选缓冲液（EasylsoBuffer） 货号：EISO0500
• 1XPBS 货号：B0150001
• ActBeads™鼠T细胞激活磁珠（大包装） 货号：AM2001
• LeEasyIso™鼠CD3 T细胞分离试剂盒 货号：SN4101
• EasyIso™鼠CD4 T细胞分离试剂盒 货号：SN4102
• EasyIso™鼠CD8 T细胞分离试剂盒 货号：SN4103
• EasyIso™鼠Naive CD4 T细胞分离试剂盒 货号：SN4104
• EasyIso™鼠CD19 B细胞分离试剂盒 货号：SN4001

在增殖细胞的DNA合成期，可以采用胸腺嘧啶类似物（如BrdU或EdU）检测细胞增殖比例。BrdU方法为：在T细胞激活后加入BrdU（浓度10μM）孵育4-24小时，然后进行固定和抗体检测。而EdU方法则推荐使用，因为其流程较快，操作便捷：在培养中加入EdU，利用点击化学反应，通过Cu⁺催化将EdU与荧光染料偶联，实现免抗体直接检测。

两种方法适用的场景包括固定时间点的增殖率检测（如药物处理24小时后的效果）和组织切片中的原位增殖分析。此外，增殖细胞的线粒体代谢活性增强时，可以利用还原染料（如MTT和XTT）来产生有色产物，进而利用吸光度（OD值）反映活细胞数量。

刺激培养可在96孔板（1×10⁵/孔）中进行，激活后加染料，如MTT法在培养结束前4小时加入，然后用DMSO溶解。而CCK-8法（推荐）则为直接加入CCK-8试剂（10%）后孵育2-4小时，通过酶标仪检测OD值。这些操作无须特殊设备，适合高通量药物筛选。然而，由于增殖与代谢活性并不完全等同，因此分析时需谨慎。

结合这三种方法的原理与优化要点，尊龙凯时能满足绝大多数T细胞增殖研究的需求，为探索免疫机制或开发治疗方案提供精准的数据支撑。