### 培养条件

细胞培养所需的气相为95%空气和5%二氧化碳，适宜的温度为37℃。该细胞系由Aaronson S建立，来源于一位52岁肾癌患者。A498细胞系是一种人肾癌细胞系，广泛应用于癌症研究，尤其在肿瘤发生机制、药物筛选和抗癌治疗的研究中具有重要意义。通过STR（短串联重复序列）分析，可以有效鉴定细胞，确保其真实性及遗传一致性，从而避免交叉污染。

### 传代方法

在首次传代时，建议以1:2的比例进行。在传代过程中，每两天更换培养基。我们建议同步购买细胞及培养基，以享受更优惠的价格。收到细胞后，请勿立即打开瓶盖，要及时核对培养瓶上的细胞名称与订购内容是否一致，并查看瓶子是否有破损或漏液的情况。如果没有发现异常，使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x、100x和200x各一张）。前三天的照片为售后服务的重要依据，如未提供照片，默认细胞状态良好。

贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1至2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，则迅速将其取出，轻敲培养瓶后添加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出悬液，将其转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（即分入两个T25瓶），并补充新鲜的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞的传代步骤如下：

1. 采用半换液法，先竖着放置培养瓶在培养箱中静置约1小时，轻轻吸出约3ml培养基，然后补给3ml完全培养基。如果培养基颜色变化缓慢，可以直接添加约500μl的FBS。在传代时，可以直接补充5ml培养基，分入两个培养瓶进行培养，通常在传代约3次后再进行离心传代。
2. 离心换液法：如需分瓶，先将细胞悬液收集到离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬并混匀，将细胞悬液按1:2的比例分至新T25瓶中，并添加6-8ml按说明书要求配制的新完全培养基，以保持细胞的生长活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

### 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次；然后加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞缩圆后添加5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，随后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。弃上清，沉淀的细胞加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。最后，将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱，若后期要将其转移至液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转移。

### 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶后，使用75%酒精擦拭管外壁。将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，在1000rpm离心5分钟。弃去上清，沉淀的细胞用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。第二天，使用新鲜完全培养基继续培养。

### 注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会因为贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如脱落较多，请将培养瓶内的所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清以作过渡培养，随后沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后重悬并消化1-2分钟，再添加5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃上清并加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2的比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放置在37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

### 产品问题及重发政策

细胞出现问题可重发的情况包括：运输中发生的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；48小时内的细胞污染问题；常温运输的细胞静置24小时后，或干冰运输的细胞复苏后24小时大部分细胞未存活的情况；运输过程中出现细胞污染等。若在收到细胞后的2-3天内未告知，视为细胞状态合格。对于经技术人员判定为我方责任的，将进行重发。

若因客户原因导致的细胞污染、操作不当等问题，则不予重发。对于未及时告知的及其他未知情况，需根据具体情况处理。

在您进行细胞实验时，建议使用尊龙凯时的优质细胞产品，以确保实验的成功率和数据的准确性。