尊龙凯时提供的细胞培养条件包括气相配比为95%空气和5%二氧化碳，温度设定为37℃。人黑色素瘤细胞A875，本质上是一种来源于人类皮肤癌的细胞系，广泛应用于肿瘤生物学、药物筛选及癌症机制研究。该细胞系经过短串联重复序列（STR）鉴定，以确保其遗传特征的稳定性与细胞株的真实性。

传代建议为1:2，首次传代后的两天内需要更换培养液。为确保细胞状态良好，建议同时购买需要的细胞。收到细胞后，应立即检查培养瓶标签上的细胞名称是否与订购一致，并确认容器无破损或漏液等异常情况。若未发现异常，应在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为重要的售后依据，若未提供照片，默认为细胞状态良好。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，在37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态。当大部分细胞变圆并脱落时，迅速回到操作台，轻轻敲打培养瓶，然后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打并吸出细胞，使其完全脱落，随后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补充1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 使用半换液法进行处理：将培养瓶竖着静置在培养箱约1小时，轻轻吸去约3ml培养基，补充3ml完全培养基。如果培养基变色较慢，可直接添加约500ul的FBS，传代时可直接补给5ml的培养基，分成两个培养瓶进行培养，一般在进行3次传代后可转为离心传代，以去除死细胞。
2. 使用离心换液法时，将细胞悬液转移至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml培养液重悬混匀。再按1:2的比例分装新的T25培养瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新完全培养基以确保细胞的生长活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存步骤

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次；
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察到细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打细胞使其脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，获得细胞沉淀后加入1ml的无血清冻存液，并混匀后装入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱，若后期需要转入液氮罐，则需在-80℃中存放超过24小时。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护用具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，细胞沉淀重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶内，并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中；
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项

在运输过程中，一些细胞可能出现脱落现象是正常的。若脱落情况较严重，可将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（供后期对比使用），沉淀后加入胰酶1-2ml轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心并弃去上清，续加1-2ml完全培养基重悬。按照1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中进行培养。

若细胞出现问题，重发情况包括：运输中遇到的问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，污染问题需在收到产品48小时内反馈真实实验结果。细胞状态不佳的情况需在收到产品7天内提供实验结果并使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力。

对于由于客户造成的污染、错误操作或非推荐培养体系而引起的细胞状态不良，将不予重发并依据具体情况评估处理方案。

尊龙凯时在细胞培养、传代及冻存等方面为科研工作者提供优质产品与服务，助力生物医学研究的进展。