尊龙凯时提供细胞培养的最佳指导，确保您在实验室中获得优质的细胞生长环境。以下是详细的培养条件和操作步骤。

培养条件

尊龙凯时建议在气相中使用95%空气和5%二氧化碳的组合，温度设置为37℃。在传代过程中，首次传代比例为1:2。

传代方法

收到细胞后，首先使用75%酒精消毒整个细胞瓶，接着在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，待细胞状态稳定后再进行后续处理。

显微镜观察

使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的图像（最佳为40x、100x和200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认已收到良好细胞状态。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml液体并放入37℃、5% CO2孵箱；若细胞密度超过80%，可立即进行传代。

贴壁细胞传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃下消化1-2分钟。显微镜下观察细胞状态，如大多数细胞已变圆并脱落，快速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，然后吸出悬液至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，再加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞。接着加入0.25%胰蛋白酶约1ml，待细胞回缩后加入5ml完全培养基终止消化，轻吹使其脱落，移至15ml离心管中并以1000RPM离心5分钟。随后，弃去上清液，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转入冻存管中，最后将冻存管置于-80℃冰箱保存。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管后，需快速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管内无结晶。然后用75%酒精消毒冻存管外壁。将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。弃去上清，重悬细胞后接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2条件下继续培养，第二天更换为新鲜完全培养基。

注意事项

在运输过程中，有些细胞可能因为贴壁不牢而脱落，这是正常现象。若脱离较多，建议将培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟，并收集上清作为过渡培养。之后，添加胰酶进行消化，并重新分瓶传代，以确保细胞的活力和生长。

选择尊龙凯时，让您的细胞培养与时俱进，并确保最佳的实验结果。