尊龙凯时人小细胞肺癌细胞DMS114的培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议1:2的传代比例。
备注：收集培养基时，请使用无菌离心管用于对比培养，如效果不佳，建议直接使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理及培养方法

收到细胞后，待细胞恢复至良好状态后，填满完全培养液并封闭瓶口是最佳运输方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长并进行不同倍数拍照保存（建议40x, 100x, 200x每种各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

1. 如果细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，预留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2培养箱；
2. 如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：
    1）弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次；
    2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟；显微镜下观察细胞消化情况，当细胞变圆并脱落后，快速取回，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
    3）轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基进行重悬。
    4）将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（例如两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化；
3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
4. 去除上清后，将细胞沉淀加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中；
5. 将冻存管直接放入-80℃冰箱中，若后续需转入液氮罐则需在-80℃保存24小时以上再转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭外壁；
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 去除上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱培养；
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因粘附力不足而发生脱落，这是正常现象。如脱落较多，请将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟进行暂时培养。然后重悬后，使用消化液处理并进行细胞传代（分瓶比例1:2）。补充新培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

五、售后条款

1）若细胞出现问题，重发的情况如下：
    1. 运输过程中遇到问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等），可申请重发；
    2. 细胞污染问题需在收到48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
    3. 常温发货细胞静置24小时后，若复苏后大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可申请重发；
2）不予重发的情况包括但不限于：因客户操作不当导致的细胞损坏、非尊龙凯时推荐的培养体系影响细胞状态等情况。