病理学技术是生物医学领域中重要的诊断基础,其发展直接影响到病理诊断学的进步。最初在进行诊断时,我们主要从形态学、组织学和生化层面来做分析。病理学的核心在于研究疾病的发生和发展规律,尤其关注在这一过程中组织和细胞的代谢、功能及结构变化。
进行染色实验时,前期的组织处理至关重要,其涉及多个环节,包括取材、固定、脱水、透明、浸润、包埋、切片和染色等步骤。
组织取材与固定
1. 在取材时,宜选择新鲜、大小适中的组织块,避免挤压变形,保持组织的原有形态和清洁。组织块的尺寸一般不超过2×15×0.3 cm。
2. 固定是关键步骤,通常使用10%甲醛溶液或其他固定液,如Carnoy固定液,固定时间根据组织块大小决定(一般不宜超过24小时),以防组织自溶或腐败。
3. 固定液的选择会显著影响后续染色效果,例如,Bouin's固定液特别适用于染色效果好的组织。
组织固定的目的
组织固定主要有以下几个目的:
- 破坏细胞内的溶酶体酶,以防止自溶。
- 杀死外来细菌,避免成为细菌培养基,防止组织腐坏。
- 尽可能维持细胞活体时的结构和形态。
- 凝固、沉淀细胞内的原有产物,保持物质的稳定性,以便于后续染色。
- 保持组织的硬度和弹性,防止在后续处理过程中扭曲变形。
- 区分不同细胞的折光率,使得染色后结构更加清晰。
- 对组织的分析性染色起媒染作用,增强特定组织染色的效果。
- 保存组织细胞的抗原性,为免疫组化染色提供基础。
组织固定的注意事项
1. 固定必须及时,组织离体后应在1小时内立即固定。
2. 固定液的选择应根据实验需求选择合适的固定液。
3. 固定液的用量应大于组织体积的4-10倍。
4. 固定液的浓度要准确,避免过稀或过浓影响效果。
5. 固定温度应在室温或者35-37℃的全封闭处理机中,温度过高会导致组织自溶及过度收缩。
6. 新鲜标本的固定时间应为12-24小时,大标本在室温下需要再固定4-6小时,小标本应固定3-4小时,低温环境下需适当延长时间,但固定总时间不超过48小时。
7. 对于需要进行分子病理分析的标本,从离体到组织脱水的总固定时间一般不超过24小时,并确保不少于6小时。
Bouin's固定液的应用
尊龙凯时的Bouin's固定液(产品编号:BL-G016)主要成分包括PA、甲醛和乙酸,广泛用于细胞和组织的固定,便于后续的染色、观察和分析。该固定液在免疫组化、病理学和胚胎学研究中应用广泛,尤其适合在特殊实验中,如研究鸡法氏囊的显微结构时。此外,通过使用Bouin's固定液,还可以在整体染色法中有效节省实验人力和物力。
在生物医学领域中,优质的病理学技术和适当的固定方法是确保实验成功的关键,选择尊龙凯时的产品将为您的研究提供强有力的支持。