尊龙凯时为您提供大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养指导，确保您在实验过程中获得高质量的细胞活性。以下是详细的细胞培养步骤与注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：适应于贴壁和悬浮混合生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K培养基 + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：建议首次以1:2比例进行传代，每2天更换培养液。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，为保证其良好状态，需及时添加完全培养液并封闭瓶口。建议用75%酒精对瓶外表面进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时以恢复细胞状态，并通过显微镜观察细胞生长情况，拍摄不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片将作为售后依据；若不提供照片，则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留下约5ml完全培养基并在37℃、5% CO2孵箱中培养。当细胞密度超过80%时，进行传代：
1）对于贴壁细胞：
- 弃去上清液，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
- 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞状态并 когда大部分细胞变圆并脱落时，加入超过5ml的完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打以使细胞完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃上清液并补加1-2ml完全培养基重悬。
- 按1:2比例分瓶传代，将细胞悬液分入两个T25瓶中，并加入5-8ml新培养基，放入37℃，5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
2) 对于悬浮细胞，采用以下两种方法进行传代：
- 方法一：收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液搅拌均匀，然后按1:2比例分配至新瓶中。
- 方法二：可选择更换一半的培养液，弃去一半后将剩余细胞悬起，按1:2比例分配至新的培养瓶中。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞；
2. 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，倒置观察，待细胞开始回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落。将悬液转移至15ml离心管并在1000RPM下离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞并加入1ml无血清冻存液，混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若后期要转入液氮罐，需先在-80℃冰箱保存24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后擦拭外壁；
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬细胞，然后接种至T25培养瓶，放入37℃，5% CO2培养箱中继续培养。第二天更换新鲜完全培养基。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能会脱落。这属于正常现象。如果观察到大量细胞脱落，可以将所有培养液收集至离心管，进行离心后收集沉淀，重新消化并进重悬，再按比例传代。尊龙凯时提醒您在处理团块时要轻柔，避免细胞损伤。

五、售后条款

1）细胞出现问题时可重发的情况包括：
- 细胞在运输过程中如出现丢失、破损、严重漏液等情况；
- 收到细胞48小时内发现污染问题，并提供真实实验结果时；
- 常温发货细胞静置24小时后，干冰发货细胞复苏后24小时内未存活并提供照片；
- 其他符合规定的情况将依具体情况处理。

2）细胞出现问题不予以重发的情况：
- 客户自行造成的污染；
- 不正确操作导致细胞状态不良；
- 不符合推荐条件的培养系统导致细胞不良；
- 未提供前三天照片的情况等。
尊龙凯时致力于提供最优质的细胞服务，感谢您的支持与合作。