胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）是从健康母牛怀孕4至8月龄的胎牛血液中提取的，经过无菌采集、分离和微孔过滤等一系列工序制成的。其在各类真核细胞的培养中被广泛应用，能够提供关键的营养成分及生长因子，成为实验室中不可或缺的材料。为了充分发挥胎牛血清的效果，确保细胞的良好状态，我们整理了一些小贴士，希望能帮助实验伙伴顺利进行细胞实验。接下来，一起来了解一下吧。

一、初次开封的胎牛血清如何解冻？

标准的胎牛血清储存温度为-20℃，长期保存时可放置于-80℃。在解冻时，应避免直接在常温（25-37℃）下解冻，以免形成絮状沉淀，影响血清品质。推荐的解冻方法是将血清从-20℃或-80℃转移至4℃，待完全液化后再转至室温。在解冻过程中，适时摇动容器，有助于成分和温度更均匀地混合，减少沉淀。解冻后，可以将血清分装于15mL或50mL的无菌离心管中，根据使用频率在4℃保存，建议一管已解冻的血清在一个月内使用完毕。解冻后的胎牛血清不应在37℃或室温下存放过久，以防重要的细胞生长因子失活，从而影响细胞状态。

二、血清的使用量

原则上，添加的胎牛血清量应控制在5%、10%或20%。大部分细胞在培养时使用10%的血清浓度，有些细胞在原代提取时可使用20%血清。具体的适应浓度需根据细胞特性和实验目的进行调整。

三、何时需要热灭活血清？

热灭活通常指将解冻后的血清在56℃下处理30分钟，以去活化补体。补体参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩等。对于常规细胞培养，热灭活并非必需，经过处理的血清对细胞生长影响甚微，反而可能因高温而降低血清质量，从而影响细胞生长速率或增加沉淀物。

四、更换血清的正确步骤

在细胞培养中，可能需要更换血清。如果直接使用另一种血清制备的培养基，细胞的生长可能受到影响。细胞通常会适应原有培养环境，突然更换营养环境（即使是优质血清）可能会导致不适应。更换血清时，建议按比例梯度更换，初次换液可采用原培养体系与新体系1:3的比例，后续依次为1:1，3:1，直至完全替换。对于对培养体系敏感的细胞，替换比例需更为细致。

五、解冻后血清出现悬浮物问题

解冻后如发现少量乳白色絮状或点状物，这是由于血清中的脂蛋白变性或纤维蛋白形成的。这些悬浮物不会影响血清本身的质量，经过400×g离心5分钟取上清可以继续使用，对细胞影响不大。

六、血清使用前是否需要过滤？

一般情况下，供应商提供的胎牛血清已为无菌，通常不需再过滤。如果发现血清有悬浮物，可以将其与培养液一起过滤，切勿直接过滤血清。

七、观察到活动的“小黑点”是否为污染？

在细胞培养过程中如发现黑点，需先观察培养基是否混浊，黑点是否不规则游动。如果细胞被污染，培养基会迅速变黄、混浊。黑点出现可能是细胞自我破碎后的残骸、血清中的杂蛋白或培养基用水质量不达标等。可通过离心或过滤方法去除这些黑点。在使用原代细胞时，黑点可能是组织中的杂质，多次传代可消除。

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