慢病毒感染细胞为何感染效率低下？慢病毒不仅能有效感染分裂和非分裂细胞，它还能够将外源基因整合进宿主染色体，从而实现持久表达，且不易引发免疫反应，因而被视为“细胞实验的理想选择与体内实验的必备工具”。在基因治疗领域，慢病毒作为载体因其在各种遗传性和后天性疾病的治疗中表现突出而备受青睐。无论是在基础研究还是临床应用中，高纯度、高滴度的慢病毒都是基因操作的完美工具。不同实验中使用的细胞类型会导致慢病毒感染效率的差异，因此，为了提高感染效率，选择合适的实验步骤和最好条件是成功的关键。

以“24孔培养板、贴壁细胞”为例，慢病毒感染细胞的常规操作步骤如下：

Day 0：接种细胞

每孔加入5×待感染细胞，并用含10%FBS的DMEM培养基培养。

Day 1：细胞感染

在感染前，根据说明书使用完全培养基配置感染液，吸掉旧培养基并更换为感染液。参考细胞的MOI（复感染指数）的计算，确定病毒使用量并加入病毒进行感染，轻轻混匀。

Day 2：换回常规培养基

病毒感染8-16小时后，换回常规培养基，继续培养细胞。

Day 3-4：确认感染效果

经历72小时后，通过显微镜观察感染效果，例如EGFP或Cherry的表达情况。如果您认为所有细胞操作都如此简单，那您真是过于年轻且简单了！在慢病毒感染过程中，您可能会遇到多种问题。

MOI的重要性

在细胞感染过程中，MOI是一个关键指标。那么如何确定MOI值呢？MOI代表复感染指数，表示病毒感染细胞的能力，MOI越高，细胞受到感染的难度也相应增加。通常，将某株细胞80%被感染所需的病毒颗粒数与细胞数的比值作为该细胞系的MOI计算公式为：MOI = （病毒滴度×病毒体积）/细胞数量。

感染条件及MOI选择原则

1. 在细胞形态不受影响的情况下，尽可能使用较少的病毒感染细胞；
2. 选择感染效率约80%的条件作为最佳感染条件。通过细胞感染预实验，您可以找出慢病毒对细胞的最佳感染条件，从而确定细胞的MOI并进行正式实验。

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